酶聯法檢測血吸蟲抗體

    [方法學原理]  將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯結形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物；再加HRP標羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標記抗體復合物，在此基礎上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。

    [標本準備]  不抗凝靜脈血2ml

    [試劑]

    1．日本分體血吸蟲可溶性抗原

    2．HRP標記羊抗人IgG

    3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液

    4．稀釋液和洗滌液

    5．酶底物液

    6．2mol／LH2504溶液

    7．正常人（陰性對照）血清

    [檢測步驟]

    1．日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原用pH9．6碳酸鹽緩沖液作1：3 000稀釋，包被反應板，每孑岫口lOOtA，置4℃環境中過夜。

    2．用前洗滌包被板3min× 3，加被檢血清，每份標本做3孔，每孔lOOgl，另加正常人（陰性對照）血清2孔。37C環境中保溫2h，洗滌3minX3。

    3．加HRP-抗人IgG，每孔100gl，37℃環境中放置2h，洗滌3rainX3。

    4．加酶底物液每孔100~1，于室溫環境中避光保存30min，各孔加2mol／L H₂S0₄ 1滴終止反應，用酶標比色儀490nm測各孔A值。

    [參考范圍]  血吸蟲抗體陰性

    [注意事項]

    1．待檢血清應新鮮或冰凍保存，不能污染。

    2．在實驗室的全部洗滌過程中，清洗要*，以除去末參與反應的所有物質。

    3．試劑盒應保存于4一-20C冰箱中，用前取出，待試劑恢復至室溫后使用。

    [臨床意義]  糞便中蟲卵陽性者血清中抗體檢出率為97％以上，正常人有2％～3％假陽性。不同種屬寄生蟲無明顯交叉反應。1979年，Tamaka應用ELISA間接法測日本分體血吸蟲患者抗體陽性率為100％。本法具有高度的敏感性，但有1％一2．3％假陽性，對同種屬曼氏和埃及血吸蟲有交叉反應。