連接scFv和載體DNA并轉(zhuǎn)化大腸桿菌

[器材和試劑]
● 去離子水（millipore）
● T4DNA連接酶和10×連接酶緩沖液（NEB）
● 16℃水浴
● 消化的scFv文庫DNA
● pHENl DNA，用NcoI和NotI消化（100ng／ul）
● 電感受態(tài)大腸桿菌TGl細(xì)胞（Strat aeene）
● 用于將scFv文庫電轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TGl株的試劑和設(shè)備

[方法]
1．配制1個50ul連接混合液，包含：
● 10×連接緩沖液，5uI
● 水，16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul）， 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文庫（100g/ul）, 7ul
● T4 DNA連接酶（400U／ul），2ul
2．16℃孵育反應(yīng)液過夜。
3．乙醇沉淀DNA并用70％乙醇洗滌沉淀1次。
4．重懸DNA于10ul水中。
5．用4份相同的2．5ul的DNA分別電轉(zhuǎn)化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細(xì)胞中。
6．確定文庫容量，并將菌文庫材抖儲存于-70℃。

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